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      細胞庫實(shí)踐綜合指南

      更新時(shí)間:2024-04-09      點(diǎn)擊次數:255

      細胞培養的有效管理對于保持其在研究和治療應用中的完整性至關(guān)重要。細胞系的連續或長(cháng)期培養會(huì )導致各種并發(fā)癥,例如:

      • 微生物污染:

        開(kāi)放培養容易受到各種微生物感染,這些微生物會(huì )改變細胞行為和生存能力。
      • 特征變化:

        關(guān)鍵的細胞特征,如抗原表達或抗體產(chǎn)生,可能會(huì )隨著(zhù)時(shí)間的推移而丟失。
      • 遺傳變異:

        基因組不穩定性可能發(fā)生在以核型不穩定而聞名的細胞系中,從而導致不可靠的實(shí)驗結果。
      • 壽命限制:

        某些類(lèi)型的細胞在進(jìn)入衰老和停止增殖之前分裂次數有限。
      • 交叉污染風(fēng)險:

        長(cháng)期培養增加了一個(gè)細胞系污染另一個(gè)細胞系的風(fēng)險,從而導致錯誤的數據。
      • 資源密集度:

        長(cháng)期培養需要更多的消耗品和勞動(dòng)力,大大增加了成本。

      細胞庫的戰略方法

      細胞庫系統是減輕上述風(fēng)險的戰略方法。推薦的系統是主小區銀行系統,包括以下步驟:

      1. 初始隔離:

        新獲得的細胞培養物應在嚴格的檢疫條件下隔離和處理,以防止實(shí)驗室污染。
      2. Token Stock Establishment:

        初始培養擴增后,應冷凍保存少量安瓿瓶(3-5瓶)作為應急備用的象征性?xún)洹?/trans>
      3. 主細胞庫形成:

        從代幣儲備安瓿瓶擴大培養物,以建立由大量安瓿瓶組成的主細胞庫(10-20個(gè)或更多,根據計劃使用情況而定)。
      4. 嚴格的質(zhì)量控制:

        主細胞庫的一個(gè)子集經(jīng)歷了全面的質(zhì)量控制測試,其中包括評估細胞活力,確認不存在微生物污染物,并可能進(jìn)行病毒和真實(shí)性測試。
      5. 工作細胞庫的開(kāi)發(fā):

        然后使用主細胞庫的一部分創(chuàng )建工作細胞庫,這是積極研究和應用的主要來(lái)源。

      詳細的質(zhì)量控制協(xié)議

      質(zhì)量控制是維護細胞庫的關(guān)鍵部分。它包括:

      • 生存力和計數測試:

        確保細胞存活且數量充足。
      • 微生物篩選:

        定期檢測細菌、真菌和支原體以防止細胞培養受損。
      • 認證程序:

        通過(guò)DNA分析等方法確認細胞系的身份。

      存儲和使用建議

      正確的儲存條件如下:

      • 專(zhuān)用存儲設施:

        利用專(zhuān)門(mén)為儲存細胞庫設計的設施,如液氮罐或電冰柜,以防止交叉污染并確保長(cháng)期生存能力。

      一致性和質(zhì)量保證:

      • 一致的細胞材料:

        細胞庫系統確保實(shí)驗中使用的所有材料都來(lái)自一致的來(lái)源。
      • 受控通道數:

        通過(guò)使用在可控傳代次數范圍內的細胞,實(shí)驗可變性被最小化。
      • 適時(shí)文化實(shí)踐:

        僅在必要時(shí)培養細胞有助于保持細胞系的原始特性,并降低與保持連續培養相關(guān)的成本。


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