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      對細胞進(jìn)行鋪板要進(jìn)行哪些操作

      更新時(shí)間:2023-03-07      點(diǎn)擊次數:1078
        細胞鋪板是細胞實(shí)驗中最常見(jiàn)又必須掌握的一門(mén)技術(shù),看似簡(jiǎn)單,然而卻經(jīng)常遇到如細胞居中或者中間稀疏等不均勻分布的現象,結果就是只能整板扔掉,重新鋪板,既耽擱時(shí)間又浪費了細胞及培養板等資源。所以在進(jìn)行細胞鋪板的時(shí)候應該注意哪些事情。
        細胞居中和細胞邊緣化
        從經(jīng)濟和高效的角度來(lái)說(shuō),需要根據實(shí)驗目的選擇不同規格的培養板。如在進(jìn)行藥物對待測細胞半抑制率(IC50)測試時(shí),通常使用96孔板,一方面可以設置濃度梯度;另外還可一次性測多個(gè)藥物,減少實(shí)驗誤差。
        收集細胞要混勻
        消化后的細胞一定要充分混勻,要把聚在一起的細胞團充分地吹打開(kāi),最好是單個(gè)的狀態(tài),但同時(shí)又不能損傷細胞,可以用玻璃吸管的移液器操作。離心也很有講究,一般用1000 rpm/min即可。離心力太大細胞容易抱團!然后懸浮離心后的細胞團時(shí),先不要把所有液體都加進(jìn)去!一般先加2mL液體,然后用1mL移液器輕輕將細胞吹起,細胞要像云霧一樣散開(kāi),這樣易于形成單細胞。象下圖所示的這種移液器就非常好用。
        接種細胞須小心
        鋪6孔板,12孔板或24孔板,先在每個(gè)孔里面加1mL的培養基,晃動(dòng)使之鋪勻整個(gè)孔底,然后加入1 mL的細胞懸液。從孔的左邊靠近底部慢慢加入,這樣細胞懸液會(huì )平鋪在整個(gè)孔底,細胞分散較均勻,注意加完細胞懸液后要放工作臺靜置一下。
        輕輕敲打勿抱團
        細胞懸液加完后,將細胞培養板抬高,對著(zhù)燈光,從底部往上看,看細胞有沒(méi)有抱團。如果有抱團的話(huà),用手指從底部輕輕敲打,使之分散。也可以用平板振蕩器稍稍振蕩一下,效果不錯。參數要設置成振幅小而頻率高。
        十字交叉要水平
        觀(guān)察和敲打后放入培養箱,然后畫(huà)“十字”,就是把細胞培養板貼著(zhù)培養箱擱板,前后方向來(lái)回晃動(dòng)10次,再左右方向晃動(dòng)10次,正好是一個(gè)“十” 字形。然后就讓它靜靜地呆在培養箱擱板上,沒(méi)事不要去動(dòng)它。這里要注意的是,托架應該裝在四根立柱相同高度的孔上,培養箱的擱板要水平校正,盡量地做到水平。擱板會(huì )向一個(gè)方向傾斜,對于貼壁時(shí)間長(cháng)的細胞,就算當時(shí)混勻了,放進(jìn)培養箱后也搖勻了,但是重力作用下細胞也會(huì )向一側聚集。 培養箱里面或者外面盡量不要放可以產(chǎn)生振動(dòng)的儀器,比如蠕動(dòng)泵、離心機、渦旋器一類(lèi)的儀器。這些儀器產(chǎn)生的振動(dòng)對細胞貼壁有影響,也可能會(huì )導致細胞貼壁不均勻。
       
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