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      Caprico Biotechnologies流式細胞抗體該如何選擇?

      更新時(shí)間:2022-11-02      點(diǎn)擊次數:811
        Caprico Biotechnologies流式細胞抗體本身也是抗體,所以選擇流式抗體一定要滿(mǎn)足抗體選擇最基本的條件:目標蛋白特異性,反應種屬以及應用實(shí)驗。在流式實(shí)驗過(guò)程中,盡量減少實(shí)驗工序和過(guò)程,以保證實(shí)驗的真實(shí)和準確性。因此在條件允許的范圍內,建議盡量用直接標記的抗體進(jìn)行實(shí)驗而不去做間接標記。
       
        由于在流式細胞實(shí)驗過(guò)程中,熒光抗體對單細胞懸液的標記效果直接影響實(shí)驗的數據質(zhì)量。因此,需要考慮各種影響流式抗體品質(zhì)及檢測效果的因素,例如抗體特異性、熒光素信號強弱、熒光素標記方式、同型對照等。
       
        流式抗體的選擇: 
        1、流式抗體本身也是抗體,所以選擇流式抗體一定要滿(mǎn)足抗體選擇最基本的條件:目標蛋白特異性,反應種屬以及應用實(shí)驗。
       
        2、流式抗體熒光標記的方式包括直接標記和間接標記兩種。在流式實(shí)驗過(guò)程中,盡量減少實(shí)驗工序和過(guò)程,以保證實(shí)驗的真實(shí)和準確性。因此在條件允許的范圍內,建議盡量用直接標記的抗體進(jìn)行實(shí)驗而不去做間接標記。
       
        3、流式抗體熒光標記的選擇:如果實(shí)驗中檢測單一指標:不同熒光標記在不同的儀器上強度不同。FACS Calibur儀器為例:PE >APC >PE-Cy5 >PerCP >FITC >PerCP-Cy5.5,通常來(lái)說(shuō),PE強,適用于弱表達抗原。FITC強度較弱,適用于強表達抗原,使用范圍比較廣。用戶(hù)需根據檢測的目標蛋白進(jìn)行具體選擇。
       
        如果同時(shí)檢測多個(gè)指標:確認流式細胞儀能檢測多少個(gè)通道:流式抗體每個(gè)通道只能選擇1種熒光素。各個(gè)通道之間的熒光素可以隨意搭配。如:實(shí)驗者同時(shí)檢測三個(gè)指標,可以在圖1中綠色、黃色和紅色三個(gè)通道中各選一個(gè)適當的熒光素標記,FITC、PE和PE-cy5。切忌所有指標選擇同一個(gè)通道的熒光標記,以防止熒光的重疊和相互干擾,影響最后結果。因此,流式細胞儀的通道越多,同一份樣本能同時(shí)做的表面/胞內標志就越多。常用熒光標記包括FITC, PE, PEcy5, PEcy5.5, APC等。
       
        同型對照的選擇: 
        流式細胞實(shí)驗和其他抗體相關(guān)實(shí)驗有點(diǎn)不同的就是需要選擇同型對照。同型對照,是用于消除由于抗體非特異性結合到細胞表面而產(chǎn)生的背景染色,相當于實(shí)驗的陰性對照。同型對照選擇與標記抗體同種屬來(lái)源,同亞型,同熒光標記的抗體。比如:抗人的CD3的PE標記的抗體,小鼠的IgG2a。同型對照選擇PE標記的小鼠的IgG2a。
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