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      不同轉染試劑的原理有哪些

      更新時(shí)間:2022-06-22      點(diǎn)擊次數:1978
        細胞轉染是指將外源基因如DNA,RNA等導入細胞內的技術(shù)。隨著(zhù)分子生物學(xué)的發(fā)展,轉染已經(jīng)成為研究和控制細胞基因功能、實(shí)現基因調控的常規工具。市場(chǎng)上各種轉染試劑琳瑯滿(mǎn)目,各有千秋,然而沒(méi)有任何一種轉染試劑可以能夠適用于所有細胞種類(lèi)、滿(mǎn)足所有實(shí)驗需求和目的,成分控認為轉染試劑的成分及作用機理對轉染效果及細胞生理作用影響顯著(zhù),是轉染試劑選擇的重要依據,選試劑時(shí)要留意成分。
        嚴格來(lái)講,轉染的方法可以基于化學(xué)法、物理法(電穿孔、顯微注射等)以及病毒介導法,沒(méi)有一種方法是放之四海而皆準。作為成分控的小編,本次主要為大家介紹基于各類(lèi)轉染試劑的化學(xué)法轉染。
        基于磷酸鈣成分的轉染試劑,其主要作用原理是與DNA通過(guò)沉淀反應形成磷酸鈣-DNA復合物,粘附到細胞膜表面,借助內吞作用進(jìn)入細胞質(zhì)。pH值,鈣離子濃度,DNA濃度,沉淀時(shí)間,細胞孵育時(shí)間乃至各組分加入順序都可能對結果產(chǎn)生影響,因此實(shí)驗條件摸索和優(yōu)化時(shí)間較長(cháng),且重復性不佳。
        基于脂質(zhì)體的轉染試劑包括中性脂質(zhì)體和陽(yáng)離子脂質(zhì)體兩種。中性脂質(zhì)體是利用脂質(zhì)膜包裹DNA,借助脂質(zhì)膜將DNA導入細胞膜內。目前應用比較廣泛的是帶正電的陽(yáng)離子脂質(zhì)體轉染試劑,DNA并沒(méi)有預先包埋在脂質(zhì)體中,而是帶負電 的DNA自動(dòng)結合到帶正電的脂質(zhì)體上,形成DNA-陽(yáng)離子脂質(zhì)體復合物,從而吸附到帶負電的細胞膜表面,經(jīng)過(guò)內吞被導入細胞。此方法操作簡(jiǎn)單,重復性好,在體外轉染中有很高的效率,但具有一定的細胞毒性,可能會(huì )干擾細胞的代謝。且活性受血清影響,需要去除血清。
        基于陽(yáng)離子聚合物的轉染試劑,帶正電的聚合物與核酸帶負電的磷酸基團形成帶正電的復合物后與細胞表面帶負電的蛋白多糖相互作用,并通過(guò)內吞作用進(jìn)入細胞。其又分為樹(shù)枝狀陽(yáng)離子聚合物和線(xiàn)性陽(yáng)離子聚合物兩類(lèi),前者細胞毒性相對較大,后者細胞毒性較小,但其轉染效率都高于脂質(zhì)體轉染,適用也較為廣范。
        以上單一成分的轉染試劑或聚焦于提高效率或著(zhù)重于降低細胞毒性,可謂魚(yú)和熊掌不可兼得也。
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